GB/T 14233.2-2005《医用输液、输血、注射器具检验方法 第 2 部分：生物学试验方法》 中第 3 章无菌试验规定了无菌医疗器械微生物污染检测的通用方法，适用于无菌口罩（包括医用外科口罩、医用防护口罩等灭菌型口罩）的微生物含量检测，用于验证口罩是否符合无菌要求。

试验基本要素

1. 试验目的

将无菌口罩或其浸提液接种于培养基内，检验供试品是否存在细菌和真菌污染，确认口罩灭菌效果符合要求。

2. 适用范围

适用于灭菌型口罩的无菌性检测，非灭菌型口罩通常采用 GB 15979-2002《一次性使用卫生用品》附录 B 中的微生物限度检测方法。

3. 试剂与设备

试验前准备

1. 器具灭菌

• 压力蒸汽灭菌：121°C，30 分钟

• 干热灭菌：160°C，2 小时

2. 无菌室验证

• 消毒后检查：3 只直径 90mm 培养皿，倒营养琼脂，30-35°C 培养 48h 无菌后，在操作台暴露 30 分钟，培养后平均菌落数≤1 个

• 试验过程中同步监测空气质量

3. 方法验证（关键步骤）

对未知或可疑的口罩样品，需按《中国药典》无菌检查法规定进行抑菌性验证试验，确认供试品无抑菌活性或可忽略不计，避免假阴性结果。

试验操作流程

1. 供试品数量

同一批号3-11 个单位供试品，根据口罩规格和检验需求调整。

2. 浸提介质选择

优先使用9g/L 无菌氯化钠溶液，也可选择符合《中国药典》要求的其他稀释液和冲洗液。

3. 供试液制备（核心步骤）

基本原则：优先采用将口罩或其有代表性各部分（如内层、外层、熔喷层）直接投放入培养基内培养。若口罩结构复杂不适宜直接投放，按以下方法制备：

无菌操作，制备后 2 小时内使用

按口罩表面积计算：每 10cm² 加入 1mL 浸提介质

充分振摇，确保浸提介质完全洗涤口罩表面

特殊情况可采用薄膜过滤法处理样品

4. 接种与培养

接种方式：按《中国药典》无菌检查法规定选择，可采用直接接种或薄膜过滤法

培养条件：

• 需氧菌、厌氧菌：30-35°C，培养 14 天

• 真菌：20-25°C，培养 14 天

  观察频率：每日观察，记录培养基浑浊度、菌落生长情况等

5. 结果判定

• 若所有培养基均澄清透明，无微生物生长，判定为无菌

• 若任一培养基出现浑浊或菌落生长，需进一步镜检和微生物鉴定，确认污染类型

试验报告内容

供试品名称、规格型号、生产批号、灭菌批号

供试液制备方法（直接投放 / 浸提法 / 薄膜过滤法）

接种方式、培养基种类、培养条件

每日观察结果记录

最终判定结论（无菌 / 污染）及污染微生物种类（如有）

关键注意事项

无菌操作：全过程严格无菌，防止外源性污染

样品代表性：需检测口罩关键部位（如与口鼻接触区域、呼吸阀等）

培养时间：不得少于 14 天，确保慢生长微生物充分繁殖

结果复核：出现阳性结果时，需重新取样检测并进行微生物鉴定，排除试验操作污染

与其他标准的关联

无菌口罩微生物指标判定依据：YY/T 0969-2013《一次性使用医用口罩》、**GB 19083-2010《医用防护口罩技术要求》** 等产品标准

无菌检查法细节参照：《中国药典》（现行版）附录无菌检查法规定

新版标准变化：GB/T 14233.2-2025 已删除无菌试验和细菌内毒素试验，增加浸提液制备，无菌口罩检测仍可参考 2005 版执行