一、标准基本信息

标准编号：GB 15979-2024标准名称：一次性使用卫生用品卫生要求发布日期：2024 年 6 月 25 日实施日期：2025 年 7 月 1 日代替标准：GB 15979-2002附录 B 性质：规范性附录，规定了产品微生物检测方法

二、适用范围

附录 B 适用于一次性使用卫生用品（包括非无菌口罩）的微生物检测，包括细菌菌落总数、真菌菌落总数、大肠菌群、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌的检测。

非无菌口罩属于一次性使用卫生用品中的 "其他卫生用品" 类别，适用于本附录规定的所有检测项目。

三、检测项目与指标要求

根据 GB 15979-2024 表 4 产品微生物指标要求，非无菌口罩（普通级）的微生物限量如下：

消毒级非无菌口罩的初始污染菌应≤10,000 CFU/g，其他指标与普通级相同。

四、样品采集与处理

1. 样品采集

采样数量：随机抽取5 个独立包装的样品，每个样品作为一个检测单位

采样方法：在无菌条件下，打开包装，用无菌剪刀剪取口罩的中间部分（避开边缘和耳挂），称取10g样品（精确到 0.1g）

注意事项：采样时避免污染样品，采样工具需经灭菌处理

2. 样品处理

将 10g 样品放入含有90mL 无菌生理盐水（或 0.03mol/L 磷酸盐缓冲液 PBS，含 0.1% 吐温 - 80）的无菌均质袋中

用均质器在8000-10000r/min下均质1-2 分钟，制成 1:10 的样品匀液

若样品含抑菌成分，需在稀释液中加入相应的中和剂，以消除抑菌作用

样品匀液需在2 小时内完成检测，若不能及时检测，需在2-8℃下保存，且保存时间不超过24 小时

五、具体检测方法

1. 细菌菌落总数检测

稀释：将 1:10 样品匀液进行 10 倍系列稀释，选择 2-3 个适宜稀释度（通常为 10⁰、10¹、10²）

接种：取每个稀释度的样品匀液1mL，接种于2 个无菌培养皿中（代替旧版的 5 个培养皿）

培养：倒入冷却至45℃左右的营养琼脂培养基，混匀，待凝固后倒置，在36℃±1℃下培养48h±2h

计数：选取菌落数在30-300CFU之间的培养皿进行计数，计算平均值，结果以 CFU/g 表示

2. 真菌菌落总数检测

稀释：同细菌菌落总数检测

接种：取每个稀释度的样品匀液1mL，接种于2 个无菌培养皿中

培养：倒入冷却至45℃左右的沙堡弱琼脂培养基，混匀，待凝固后倒置，在28℃±1℃下培养72h±3h

计数：选取菌落数在10-150CFU之间的培养皿进行计数，计算平均值，结果以 CFU/g 表示

3. 大肠菌群检测（定性）

增菌：取 1:10 样品匀液10mL，加入10mL 双倍浓度乳糖胆盐发酵培养基中，在36℃±1℃下培养24h±2h

观察：若发酵管产酸产气，需进行分离培养；若不产酸产气，可报告未检出大肠菌群

分离培养：将产气的发酵管转种于伊红美蓝琼脂培养基，在36℃±1℃下培养18-24h

鉴定：挑取可疑菌落（紫黑色有金属光泽）进行革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，且能发酵乳糖产酸产气，可报告检出大肠菌群

4. 金黄色葡萄球菌检测

增菌：取 1:10 样品匀液10mL，加入10mL 双倍浓度亚碲酸钾肉汤培养基中，在36℃±1℃下培养24h±2h

分离培养：将增菌液转种于Baird-Parker 培养基（新版首选）或血琼脂培养基，在36℃±1℃下培养24-48h

鉴定：

挑取可疑菌落（黑色有晕圈）进行革兰氏染色，镜检为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列

进行血浆凝固酶试验（试管法）：吸取 1:4 新鲜血浆 0.5mL，加入等量待检菌 24h 肉汤培养物，在 **36℃±1℃** 下培养，24h 内呈现凝块即为阳性

可使用生化鉴定试剂或生化鉴定卡进行鉴定

5. 铜绿假单胞菌检测

增菌：取 1:10 样品匀液10mL，加入10mL 双倍浓度绿脓杆菌增菌液中，在36℃±1℃下培养24h±2h

分离培养：将增菌液转种于 ** cetrimide 琼脂培养基 **，在36℃±1℃下培养24-48h

鉴定：

挑取可疑菌落（蓝绿色有荧光）进行革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性杆菌

进行氧化酶试验：用无菌棉签擦拭菌落，滴加氧化酶试剂，10 秒内呈现紫色即为阳性

进行绿脓菌素试验：阳性者可报告检出铜绿假单胞菌

6. 溶血性链球菌检测

增菌：取 1:10 样品匀液10mL，加入10mL 双倍浓度链球菌增菌液中，在36℃±1℃下培养24h±2h

分离培养：将增菌液转种于血琼脂培养基，在36℃±1℃下培养24-48h

鉴定：

挑取可疑菌落（β- 溶血，透明溶血环）进行革兰氏染色，镜检为革兰氏阳性球菌，呈链状排列

进行杆菌肽敏感试验：阳性者可报告检出溶血性链球菌

六、结果判定与报告

结果判定：所有检测项目均需符合表 4 中的限量要求，若有一项不符合，则判定该批次产品不合格

结果报告：

细菌菌落总数和真菌菌落总数：报告实测值，单位为 CFU/g

特定微生物（大肠菌群、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌）：报告 "检出" 或 "未检出"

检测报告需注明标准编号、检测日期、检测人员等信息

七、新版标准主要变化（与 GB 15979-2002 相比）

培养皿数量：从 "接种 5 个平皿" 改为 "接种 2 个平皿"，提高检测效率

金黄色葡萄球菌检测：增加 Baird-Parker 培养基作为首选，删除血浆凝固酶试验的玻片法，新增生化鉴定试剂使用方法

培养条件：部分检测项目的培养时间略有调整，缩短了检测周期

中和剂使用：明确了含抑菌成分样品的中和剂使用要求

结果报告：统一了结果报告的格式和要求

八、注意事项

所有检测操作均需在无菌条件下进行，避免交叉污染

培养基和试剂需在有效期内使用，且经灭菌处理

检测过程中需设置阳性对照和阴性对照，以验证检测方法的有效性

检测人员需具备相应的微生物检测资质，熟悉标准操作流程

检测结果需及时记录，原始数据需保存至少1 年