本标准规定了公共场所集中空调通风系统6类微生物指标的检测方法，适用于各类公共场所集中空调通风系统，其他场所可参照执行。以下按检测对象分类整理核心内容：

一、冷却水与冷凝水中嗜肺军团菌（第3章）

1. 检测目的

定性测定冷却水、冷凝水及其沉积物中嗜肺军团菌，评估军团菌病感染风险。

2. 核心原理

样品经培养在GVPC琼脂平板生成典型菌落，在BCYE琼脂生长而在BCYE-CYE（缺L-半胱氨酸）不生长，结合生化与血清学鉴定确认嗜肺军团菌。

3. 关键仪器与培养基

4. 采样规范

• 采样瓶：灭菌500mL广口瓶，加0.3-0.5mL硫代硫酸钠中和氧化物

• 采样点：冷却水距塔壁20cm、液面下10cm；冷凝水在排水管或冷凝水盘

• 采样量：每点无菌取水样约500mL

• 保存：2天内送达实验室，避光避热，室温≤15天，无需冷冻

5. 检验流程

1. 样品预处理：沉淀或1000r/min离心1min去杂质

2. 过滤：滤膜过滤后置于15mL灭菌水充分洗脱

3. 处理方式：洗脱液+热处理(50℃水浴30min)+酸处理(pH2.2,5min)各0.1mL接种GVPC平板

4. 培养：35-37℃、2.5%CO₂培养10天，第3天起每日观察

5. 验证：可疑菌落接种BCYE/BCYE-CYE，前者生长后者不生长为军团菌

6. 鉴定：生化（氧化酶-/+、硝酸盐还原-、尿素酶-、明胶液化+、水解马尿酸）+血清学分型

6. 结果判定

阳性：检出符合上述特征的嗜肺军团菌；阴性：未检出

二、送风中细菌总数（第6章）

1. 检测目的

定量测定送风空气中细菌污染水平，评估空气质量。

2. 核心原理

撞击法采样，营养琼脂35-37℃培养48h，计数嗜中温性需氧/兼性厌氧菌落总数（CFU/m³）。

3. 采样与培养

• 采样：撞击式采样器，采样量≥50L，采样点在送风口下方15-20cm、水平50-100cm

• 培养：营养琼脂35-37℃，48h，计数30-300CFU平板

• 结果计算：细菌总数(CFU/m³)=平均菌落数×1000/采样体积(L)

三、送风中真菌总数（第7章）

1. 检测目的

定量测定送风真菌污染，评估过敏与霉变风险。

2. 核心原理

撞击法采样，沙氏琼脂（含氯霉素）28℃培养5天，计数真菌菌落总数（CFU/m³）。

3. 关键参数

• 培养基：沙氏琼脂+氯霉素（抑制细菌生长）

• 培养：28℃，5天

• 限值参考（WS394-2012）：普通场所≤500CFU/m³；档案室≤300CFU/m³

四、送风中β-溶血性链球菌（第8章）

1. 检测目的

定性/定量测定送风空气中β-溶血性链球菌，评估呼吸道感染风险。

2. 核心原理

撞击法采样于血琼脂，35-37℃培养24-48h，观察β溶血环，结合镜检与生化鉴定。

3. 关键要点

• 培养基：血琼脂平板（羊血/兔血）

• 鉴定：革兰氏阳性链状球菌，β溶血，杆菌肽敏感，CAMP试验等

• 结果：报告有无检出，必要时定量（CFU/m³）

五、送风中嗜肺军团菌（第9章）

1. 检测目的

定性测定送风空气中嗜肺军团菌，评估空气传播感染风险。

2. 核心原理

液体冲击法采集气溶胶，经酸处理后培养，同冷却水检测流程鉴定。

3. 采样与培养

• 采样设备：微生物气溶胶浓缩器（流量≥100L/min）+液体冲击采样器（7-15L/min）

• 吸收液：GVPC液体培养基+酵母提取液双份采样

• 采样量：每点采集1-2m³空气

• 保存：4h内送实验室，避光避热

• 培养：同冷却水检测，35-37℃、5%CO₂培养10天

4. 结果判定

系统阳性：任一采样点检出嗜肺军团菌；系统阴性：全部采样点未检出

六、风管内表面细菌总数与真菌总数（第11章）

1. 检测目的

定量测定风管内表面微生物污染，评估系统清洁度。

2. 核心原理

定量采样机器人或25cm²规格板擦拭采样，分别用营养琼脂（35-37℃,48h）和沙氏琼脂（28℃,5天）计数，结果以CFU/cm²表示。

3. 采样与处理

• 采样工具：无菌棉签/擦拭布，用Tween-80水溶液湿润

• 采样面积：25-100cm²，无菌操作擦拭表面

• 处理：擦拭物放入Tween-80水溶液，10倍梯度稀释，取适宜稀释度接种

• 培养：同送风中细菌/真菌总数培养条件

七、质量控制要点

1. 所有采样器具需灭菌，操作全程无菌

2. 空白对照：每批样品设采样介质空白、试剂空白、培养空白

3. 阳性对照：定期用标准菌株验证检测系统有效性

4. 人员资质：检测人员需经专业培训，持证上岗

5. 结果报告：注明检测依据、采样点、培养条件、菌落数及换算结果

八、标准关系与限值参考

• 本标准为检测方法标准，结果判定需结合WS 394-2012《公共场所集中空调通风系统卫生规范》限值要求

• 主要限值参考：

• 冷却水/冷凝水：嗜肺军团菌不得检出

• 送风：细菌总数≤500CFU/m³；真菌总数≤500CFU/m³；β-溶血性链球菌不得检出

• 风管内表面：细菌总数≤100CFU/cm²；真菌总数≤100CFU/cm²