一、标准基本信息

• 标准编号：GB/T 18204.3-2025

• 发布日期：2025-05-30

• 实施日期：2025-12-01

• 发布单位：国家市场监督管理总局、国家标准化管理委员会

• 归口单位：国家疾病预防控制局

• 代替标准：GB/T 18204.3-2013《公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物》

• 适用范围：适用于公共场所中空气微生物指标（细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌和嗜肺军团菌）的测定，其他场所参照执行

二、沉降菌检测基本原理

自然沉降法基于地心引力原理，让空气中携带微生物的气溶胶粒子垂直自然沉降到琼脂培养基表面，经培养后计数形成的菌落数，以此评估空气中微生物污染程度。该方法操作简便，但采集效率相对较低，稳定性稍差，适合基层实验室和现场快速筛查。

三、检测指标与适用方法

四、沉降菌检测详细操作流程

1. 采样前准备

（1）仪器设备准备

• 培养皿：φ90mm无菌平皿，面积约63.6cm²

• 培养基：

• 细菌总数：营养琼脂培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基

• 真菌总数：沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）或马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）

• 辅助设备：无菌镊子、酒精灯、温湿度计、记录表格、采样标识等

• 质量控制：所有器具需经高压蒸汽灭菌（121℃，15-20分钟），培养基需进行无菌试验

（2）现场准备

• 采样前关闭门窗1小时，保持室内稳定状态

• 记录现场温度、湿度、气压等环境参数

• 采样点避开通风口、门窗边缘和人员频繁活动区域

2. 采样操作

（1）布点原则

（2）采样参数

• 采样高度：距地面0.8-1.5m（人体呼吸带高度）

• 暴露时间：30分钟（允许±5分钟浮动）

• 操作步骤：

• 用无菌镊子打开平皿盖，使培养基表面暴露于空气中

• 平皿盖需反扣在平皿旁，避免污染

• 暴露结束后，立即盖上平皿盖，做好标识（编号、地点、时间）

• 空白对照：每批采样设置1个空白样，不暴露于空气中，与样品同条件培养

3. 样品运输与保存

• 采样后4小时内送至实验室，若无法及时送达，需置于4℃冷藏保存，保存时间不超过24小时

• 运输过程中避免剧烈震动和温度变化

4. 培养与计数

（1）培养条件

（2）菌落计数

• 培养结束后，在菌落计数器或放大镜下计数平板上的菌落数

• 计数原则：

• 细菌：计数所有肉眼可见的菌落，包括不同形态、颜色的菌落

• 真菌：计数所有酵母菌落和霉菌菌落，注意区分真菌与细菌菌落

• 菌落重叠时，若能明确区分，可分别计数；无法区分时，按1个菌落计

• 空白对照平板不得有菌落生长，否则本次采样结果无效

5. 结果计算与报告

（1）计算公式

采用奥梅梁斯基公式计算空气中微生物浓度：

菌落总数（CFU/m³）= 50000 × N ÷ (A × T)

• N：平均菌落数（所有采样点菌落数的平均值）

• A：平皿面积（cm²），φ90mm平皿约为63.6cm²

• T：暴露时间（分钟），标准为30分钟

（2）结果报告

• 以CFU/m³为单位报告结果

• 保留整数，若菌落数为0，报告为"<1"CFU/m³

• 同时报告采样条件（温度、湿度、采样时间、布点方式等）

五、质量控制要求

1. 空白对照：每批样品设置1个空白样，检验培养基和操作过程的无菌性

2. 平行样：每10个样品至少设置1个平行样，平行样相对偏差应≤20%

3. 人员操作：采样人员需经专业培训，严格执行无菌操作规范

4. 仪器校准：定期校准培养箱温度，确保温度精度符合要求

5. 记录完整：详细记录采样时间、地点、环境参数、操作过程等信息，确保可追溯性

六、与2013版标准的主要区别

七、注意事项与常见问题

1. 采样高度：必须在0.8-1.5m范围内，避免过高或过低影响结果代表性

2. 暴露时间：严格控制在30分钟，避免时间过长或过短导致结果偏差

3. 菌落计数：真菌培养需5-7天，不可提前计数，避免遗漏缓慢生长的真菌

4. 结果解释：自然沉降法结果仅作参考，如需精确测量，建议采用撞击法

5. 安全防护：采样和培养过程中注意生物安全，避免交叉污染和人员感染

八、应用场景

商场、超市、酒店、餐厅等公共场所日常卫生监测

医院候诊区、学校教室、办公室等人员密集场所健康风险评估

公共交通工具（地铁、公交、高铁）空气质量监测

室内装修后空气质量验收（配合其他指标）