序列构成，氮吹仪价格茎的一端连上一个荧光分子，另一端连上一个淬灭分子（ :6,(5#,8）。当无靶序列时，分子信标 呈茎环结构，荧光分子和淬灭分子非常接近，荧光分子发出的荧光被淬灭分子吸收并以热的形式散发，检 测不到荧光信号。当有靶序列存在时，分子信标的环序列和靶序列特异的结合，形成的双链比茎环结构更 稳定，荧光分子和淬灭分子分开，荧光分子发出的荧光不被淬灭分子吸收，则可检测到荧光。 二、分子杂交的方法 !!分子杂交分为固相杂交、液相杂交和固相液相杂交。固相液相杂交是把欲检测的核酸样本或探针 先结合到固相载体上，再与液体中的探针或核酸样品进行杂交反应，漂洗去除未反应的探针或核酸样品， 经检测杂交信号，判断杂交结果。 !!（一）斑点杂交 !!斑点杂交（)$% &4$% #;&8’)’<7%’$(）是将 =>?或 ->?变性后直接点样在硝酸纤维素膜上，探针放在杂 交液内进行杂交。方法简便、快速、灵敏，用于特定基因的定性分析。 ! ! ->?点阵（->? 7887;）是将相关的探针按顺序点在硝酸纤维素膜上，待检样品放在杂交液内，检查样 品中的核酸能和哪一个探针杂交。 !!基因芯片（*,(, 5#’"@）是将探针点在硅片上，待测样品放在杂交液内进行杂交，借助计算机判断样品 中的核酸能和哪一个探针杂交。 ->?点阵和基因芯片点在固相上的是探针的序列，没有进行标记。待测 核酸样品在杂交前进行标记。 !!斑点杂交、 ->?点阵、基因芯片主要是确定待检样品中有没有所要的核酸。 !!（二）原位杂交 !!原位杂交（’( @’%6 #;&8’)’<7%’$(）是用核酸探针与细胞和组织切片中的核酸进行杂交并

对其进行检测 的方法。分为细胞原位杂交和组织切片原位杂交。原位杂交为核酸序列在细胞水平的定位和测定提供了 方法，可确定含有特定核酸序列的细胞类型和数目，可检出基因和基因产物的亚细胞定位。查明染色体中 特定基因的位置，为染色体病的诊断提供方法。 !!（三）转移印迹技术 !!转移印迹技术是将电泳和分子杂交技术结合起来的一种试验方法。根据检测样品种类的不同又分为 三类： !!（.）A$6%#,8(印迹杂交（@$6%#,8( &4$%%’(*）! ->?分子经限制酶切，在琼脂糖凝胶上电泳使 ->?片段 依据相对分子质量大小分开，再将电泳结果从凝胶中转印到硝酸纤维素膜上，经固定和变性后，在膜上与 探针进行杂交，确定电泳条带中哪一条是所要的 ->?。开始将琼脂糖上的 ->?条带转移到硝酸纤维素 膜上，采用的是用吸墨汁纸吸水（&4$%%’(*）的方法（见图 .9 9?）。英国爱丁堡大学的 B)C’( A$6%#,8(博士 第十七章 /基因技术!"! 建立了此方法， !"#$%&’(印迹杂交由此

得名。现在将 )*+转移到硝酸纤维素膜上多采用转移电泳的方法 （见图 ,--.）。 图 ,--/ !"#$%&’(印迹杂交 //（0）*"’$%&’(印迹杂交（ ("’$%&’( 12"$$3(4）/ *"’$%&’(印迹杂交是经典的 5*+分析法。操作方法和 !"#$%&’(印迹杂交方法基本相似，是将 5*+经电泳分开后转移到硝酸纤维素膜上进行杂交。 //（6）7&8$&’(印迹杂交（9&8$&’( 12"$$3(4）/ 7&8$&’(印迹杂交是将蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离 后转移到硝酸纤维素膜上，检测哪一种蛋白质能和抗体反应，也叫免疫印迹技术。 第三节 /聚合酶链反应 //聚合酶链反应（:"2;<&’=8& >%=3( ’&=>$3"(，?@5）是一种在体外由引物介导的 )*+酶促合成反应，也叫 基因扩增技术，类似体内的 )*+复制过程。主要是利用 )*+聚合酶依赖 )*+模板的特性，在一对引物 间诱发聚合酶反应。整个过程包括模板变性、模板与引物退火和引物延伸三个步骤。 ?@5具有特异性 强、灵敏度高、操作简便、对待检材料质量要求低等特点，能够快速扩增任何目的基因。 //开始进行聚合酶链反应时用的聚合酶是大肠杆菌 )*+聚合酶 !的 A2&("9片段。由于此酶不耐热， 在 )*+变性过程的高温中失活，需要不断的加入新的酶。